LysoBrite 溶酶體綠色熒光探針，用于標記活細胞的溶酶體。專有的溶解性染料可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。 溶致指示劑是疏水性化合物，易于滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被捕獲在溶酶體中。 進入溶酶體后，LysoBrite 試劑的熒光顯著增強。 可以使用熒光成像，高內(nèi)容成像，微孔板熒光測定法或流式細胞術測量所得熒光。 LysoBrite 橙色，紅色，深紅色和NIR試劑具有極高的光穩(wěn)定性和優(yōu)異的細胞保留性，可用于各種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。 它們適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。溶酶體是細胞器，其含有酸水解酶以分解廢物和細胞碎片。 溶酶體消化多余的或破舊的細胞器，食物顆粒和吞噬的病毒或細菌。 溶酶體周圍的膜允許消化酶在pH4.5下工作。 與微堿性胞質溶膠（pH 7.2）相比，溶酶體的內(nèi)部是酸性的（pH 4.5-4.8）。 溶酶體通過質子泵和氯離子通道從細胞質中泵送質子穿過膜來維持這種pH差異。

操作方法

1.制備溶酶體染色溶液：

1.1解凍 LysoBrite 染料至室溫。

1.2通過將20μL的500 X LysoBrite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足夠了。 在<-15℃下等分并儲存未使用的LysoBrite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據(jù)具體應用而變化。 可以根據(jù)特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。 c.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：a.將等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）加入細胞中。將細胞在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。 b.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。 c.使用配備有所需過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。