Hoechst 33258細(xì)胞核染料是一系列熒光染料，用于在熒光顯微鏡中標(biāo)記DNA。它們也常用于可視化細(xì)胞核和線粒體的染色。科研中通常使用的兩種分別為：Hoechst 33258和Hoechst 33342。 兩種染料都被約350nm的紫外光激發(fā)，并且都發(fā)射藍(lán)/青色熒光，發(fā)射最大值為461nm。 Hoechst染色劑可以與活細(xì)胞或固定細(xì)胞一起使用，并且通常用作另一種核酸染色劑DAPI的替代物。 它們之間的關(guān)鍵區(qū)別在于Hoechst 33342的額外乙基使其更具親脂性，因此更容易穿過(guò)完整的細(xì)胞膜。在某些應(yīng)用中，Hoechst 33258的滲透性明顯低于Hoeschst 33342。這些染料也可用于通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)射 - 含量曲線來(lái)檢測(cè)樣品的DNA的含量。

染色細(xì)胞分析方案

        以下程序適用于大多數(shù)細(xì)胞類型。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基，細(xì)胞密度，細(xì)胞類型和其他因素可能影響染色。 玻璃器皿上的殘留洗滌劑也可能影響許多生物染色，導(dǎo)致在沒(méi)有細(xì)胞存在的溶液中出現(xiàn)明亮染色的物質(zhì)。

        通過(guò)離心沉淀細(xì)胞并將細(xì)胞重懸于緩沖鹽溶液或培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)測(cè)試染料的最佳結(jié)合pH為7.4。培養(yǎng)物中的貼壁細(xì)胞可以在蓋玻片上或細(xì)胞培養(yǎng)孔中原位染色。Hoechst的染色濃度為0.5-5nM，并將其孵育15至60分鐘。在最初的實(shí)驗(yàn)中，最好在整個(gè)建議范圍內(nèi)嘗試幾種染料濃度，以確定產(chǎn)生最佳染色的濃度。