活性氧分子（ROS）是氧正常代謝過程的固有副產(chǎn)品，在細(xì)胞信號及轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中扮演著重要的角色。然而，在氧化應(yīng)激階段，ROS水平顯著增加。ROS的積聚導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重大破壞。氧化應(yīng)激通常在心血管疾病，糖尿病，骨質(zhì)疏松，中風(fēng)，炎癥以及許多神經(jīng)變性疾病和癌癥中被被發(fā)現(xiàn)。ROS的測定能幫助我們理解氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)改變的胞內(nèi)途徑。Amplite ROS熒光法檢測試劑盒使用我們獨特的ROS指示器在活細(xì)胞中測定ROS。Amplite ROS Green是細(xì)胞通透的，當(dāng)它與ROS反應(yīng)時能產(chǎn)生綠色的熒光。本試劑盒具備優(yōu)化的即用配制，能與高通量篩選的液體控制設(shè)備相配。Amplite ROS熒光法檢測試劑盒能提供敏感的、一步熒光實驗來檢測活細(xì)胞中胞內(nèi)的ROS，僅需一小時的孵育。本實驗?zāi)茉?6孔或者384孔微孔板中進(jìn)行，可以實現(xiàn)自動化無需分離步驟。它的信號能輕松被熒光酶標(biāo)儀或者熒光顯微鏡讀取。

溶液配制

1.儲備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. 1Amplite ROS Green原液（500X）：
將40μLDMSO（組分C）加入到Amplite ROS Green（組分A）的小瓶中并充分混合以制備500X Amplite  ROS Green原液。 避光。 注意：20μL的500X Amplite ROS Green原液足以容納1個平板。 

2.制備工作溶液

將20μL500XAmplite ROS Green儲備溶液加入10 mL分析緩沖液（組分B）中，充分混合，制成Amplite ROS Green工作溶液。

注意：此Amplite ROS Green工作溶液在室溫下穩(wěn)定至少2小時。

操作步驟

1.將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Amplite ROS Green工作溶液加入細(xì)胞板中。

2.將細(xì)胞在5％CO₂,37℃培養(yǎng)箱中孵育1小時。

3.用所需緩沖液（如PBS或HHBS）中的20μL11X測試化合物（96孔板）或10μL6X測試化合物（384孔板）處理細(xì)胞。 對于對照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。

4.為了誘導(dǎo)ROS，將細(xì)胞板在室溫下或在5％CO₂,37℃培養(yǎng)箱中孵育至少15分鐘或所需的一段時間（對于用1mM H₂O₂處理的Hela細(xì)胞30分鐘）。

5.使用熒光酶標(biāo)儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）監(jiān)測熒光增加，或使用具有FITC濾光器組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。