活性氧（ROS）是含氧的化學(xué)反應(yīng)性分子（如超氧化物，羥基，單線態(tài)氧和過(guò)氧化物）。由于存在不成對(duì)的價(jià)電子，ROS具有高反應(yīng)性。 ROS形成氧的正常代謝的天然副產(chǎn)物，并且在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中具有重要作用。然而，在環(huán)境壓力（例如，UV或熱暴露）期間，ROS水平可顯著增加。這可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的顯著損害。累積地，這被稱為氧化應(yīng)激。 ROS也由外源性源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應(yīng)激條件下，ROS產(chǎn)生顯著增加，導(dǎo)致隨后膜脂，蛋白質(zhì)和核酸的改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化，致癌作用，缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。細(xì)胞滲透性ROS Brite?APF和HPF試劑是非熒光的并且在與羥基自由基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生亮綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射= 490 / 515nm），APF也將與次氯酸根陰離子（OCl-）反應(yīng)。此外，APF和HPF在過(guò)氧化物酶存在下也與過(guò)氧化氫反應(yīng)?？梢允褂脽晒獬上瘢邇?nèi)容成像，微孔板熒光測(cè)定法或流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量所得熒光。 APF和HPF顯示出對(duì)光誘導(dǎo)氧化的相對(duì)高的抗性。 APF和HPF在與羥基或過(guò)氧亞硝酸根陰離子反應(yīng)之前是非熒光的。

ROS Brite 染料的分析方案

該方案僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。在制備ROS Brite 工作溶液之前，根據(jù)需要處理細(xì)胞。

1）在DMSO中制備10至20mM ROS Brite APF（或HPF）儲(chǔ)備溶液。通過(guò)將DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液（HHBS）的Hanks溶液中，制備1至10μM的工作溶液。

2）根據(jù)需要處理細(xì)胞（例如，用50-100nM血管緊張素II處理RASM細(xì)胞3-5小時(shí)）。

3）用ROS Brite APF（或HPF）（1-10μM，步驟＃1）在37℃孵育細(xì)胞20-60分鐘。

4）用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。

5）用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器在Ex / Em = 490 / 525mm（截止= 515nM）下用底部讀取模式分析細(xì)胞（例如，用于熒光顯微鏡的FITC濾光片，用于流式細(xì)胞儀的FL1濾光片）。

注意：BSA和酚紅會(huì)影響熒光，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。 APF和HPF均可用于溶液測(cè)定或細(xì)胞內(nèi)測(cè)量。