乳酸是手性的并且具有兩種光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。 在代謝和運(yùn)動(dòng)過程中，乳酸鹽通過乳酸脫氫酶（LDH）不斷從丙酮酸產(chǎn)生。 監(jiān)測(cè)乳酸水平是評(píng)估組織需氧量和利用率之間平衡的好方法，在研究細(xì)胞和動(dòng)物生理學(xué)時(shí)非常有用。 D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內(nèi)消除主要取決于腎臟排泄。 D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉類和魚類。 D-和L-乳酸含量是食品的質(zhì)量指標(biāo)，如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中異常高濃度的D-乳酸通常是胃腸道中細(xì)菌過度生長(zhǎng)的反映。

Amplite 熒光法D-乳酸檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)L-乳酸鹽或D-乳酸鹽。 生物樣品，如血清，血漿，尿液，以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品。 在酶偶聯(lián)測(cè)定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，其通過熒光NADH傳感器特異性監(jiān)測(cè)。 可以通過熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 540nm / 590nm下讀取信號(hào)。 使用這種Fluorimetric Amplite D-Lactate Assay Kit，我們能夠在100μL反應(yīng)體積中檢測(cè)到少至1.4μM的D-乳酸。 它應(yīng)用廣泛，可以很容易地適用于需要測(cè)量D-乳酸的各種應(yīng)用。

操作方法

1.準(zhǔn)備NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：

向NAD小瓶（組分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2.準(zhǔn)備D-乳酸儲(chǔ)備液：

將200μLH2 O或1×PBS緩沖液加入到D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備100mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：未使用的D-lacate標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

3.準(zhǔn)備D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（0至1 mM）的連續(xù)稀釋液：

3.1將10μLD-乳酸儲(chǔ)備溶液（來自步驟2）加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生1mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液。

3.3如說明書中的表1和2中所述，將含有D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和含D-乳酸鹽的測(cè)試樣品的系列稀釋液加入到固體黑色96孔微量培養(yǎng)板中。

4.準(zhǔn)備D-乳酸測(cè)定混合物：

4.1將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

4.2將50μLNAD儲(chǔ)備液（100X，來自步驟1）加入組分A（來自步驟4.1）的瓶中，并且要混合均勻。

注意：這種D-乳酸測(cè)定混合物足以用于一個(gè)96孔板。未使用的D-乳酸測(cè)定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

5.運(yùn)行D-乳酸測(cè)定：

5.1將50μLD-乳酸測(cè)定混合物（來自步驟4.2）添加到D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品（參見步驟3.3）的每個(gè)孔中，以使總D-乳酸測(cè)定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLD-乳酸測(cè)定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)熒光增加（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm處截止）